Вода и элюенты, готовящиеся на ее основе, нуждаются в особо внимательном отношении, так как вода очень легко загрязняется, поглощая газы и летучие вещества из воздуха лабораторного помещения. Некоторые водяные растворы, особенно буферные фосфатные, являются питательной средой, в которой быстро размножаются многие бактерии, образуя частицы колоний. Эти частицы способны засорять фильтры, нарушать работу клапанов, портить колонки и т.д. Дегазированные водные растворы очень быстро поглощают кислород из воздуха. Следует, как правило, использовать для ВЭЖХ воду максимально высокой степени чистоты, получать ее непосредственно перед работой, готовить растворитель, дегазировать его, фильтровать и затем быстро использовать. Если растворитель стоял некоторое время, его нужно перед работой проверить на отсутствие взвесей и опалесценции, профильтровать и дегазировать. Лучше всего готовить и использовать растворитель в количестве, необходимом на день работы.
Подготовка раствора пробы
Раствор пробы, как правило, нужно готовить в том же растворителе, который используют для работы. Этот способ является наилучшим, так как не дает (или почти не дает) ложных пиков на хроматограмме, связанных с вытеснительньми пиками, прохождением через детектор другого растворителя и откликом детектора на изменение при этом показателя преломления.
Если есть затруднения при растворении пробы, можно попытаться использовать для растворения один из компонентов рабочего растворителя, например, более полярный, а затем у добавить другие компоненты до получения требуемого состава. Можно ускорить или улучшить растворение, обработав пробу в ультразвуковой ванне. Можно применять и нагревание, но ри этом всегда следует учитывать возможность выпадения осадка образца при охлаждении, изменения за счет этого состава раствора и результатов анализа.
Если в пробе присутствуют нерастворимые примеси (соли, полимеры и др.), анализ которых не представляет интереса, такие пробы после растворения должны быть профильтрованы через фильтр с порами 0,2—0,5 мкм под вакуумом или, что более удобно, под давлением; можно отделять твердые частицы на центрифуге. Использование специальных центрифужных пробирок для фильтрации, состоящих из двух частей, разделенных фильтром с порами 0,5 мкм, позволяет быстро отфильтровать пробу от осадка.
Если пробу не удается приготовить из компонентов рабочего растворителя из-за плохой растворимости образца, следует попытаться подобрать растворители, используя литературные данные по растворимости или метод проб и ошибок. Когда растворитель выбран, всегда до того, как ввести приготовленный раствор пробы, сделайте холостой тестовый ввод такого же объема выбранного растворителя, но без растворенного образца. Это дает возможность оценить, какие ложные пики при вводе растворителя будут образовываться. Наконец, следует ввести раствор образца в этом растворителе. Если растворитель сильно отличается от того, который используют для элюирования, то кроме, образования ложных пиков возможно выпадение части образца в осадок в колонке или инжекторе, когда проба смешивается с элюентом. Иногда при смешивании таких разных растворителей существенно падает эффективность разделения или возможно даже исчезновение пиков компонентов пробы.
